壹(yi)、微(wei)生(sheng)物(wu)李斯(si)特(te)菌(jun)檢測(ce)板(ban)產(chan)品(pin)介紹(shao)
1、微(wei)生(sheng)物(wu)李斯(si)特(te)菌(jun)檢測(ce)板(ban)原(yuan)理(li)及(ji)適(shi)用範(fan)圍
李斯(si)特(te)菌(jun)檢測(ce)板(ban)是(shi)壹種(zhong)預(yu)先制(zhi)備好的壹次(ci)性培(pei)養基(ji)產(chan)品(pin)，含(han)有(you)標(biao)準(zhun)的(de)營(ying)養(yang)培(pei)養基(ji)，選擇性試(shi)劑，冷(leng)水(shui)可溶性吸(xi)水凝(ning)膠和(he)β-D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)苷(gan)酶(mei)(β-D-glucosidase)的(de)顯(xian)色底物(wu)( X-GLU )，適(shi)用於(yu)檢(jian)測(ce)或者(zhe)計數(shu)食品(pin)及(ji)環境樣品(pin)中的(de)李斯(si)特(te)菌(jun)菌數。李斯(si)特(te)菌(jun)檢測(ce)板(ban)檢(jian)測(ce)的(de)李斯(si)特(te)菌(jun)包括(kuo)單核(he)細(xi)胞(bao)增生(sheng)李斯(si)特(te)菌(jun)(Listeria.monocytogenes )，英諾克(ke)李斯(si)特(te)菌(jun)(Listeria.innocua)，威氏(shi)李斯(si)特(te)菌(jun)(Listeria.welshi)，但不能區分(fen)各(ge)種(zhong)菌(jun)。 
2、操作方法(fa)
2.1 食品(pin)樣品(pin)檢測(ce)
2.1.1 食品(pin)樣品(pin)處理：取樣品(pin)25 g(mL)放入(ru)裝(zhuang)有(you)225 mL滅菌(jun)磷酸鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)（或生(sheng)理鹽水(shui)）的(de)取(qu)樣罐(guan)或均(jun)質(zhi)袋內，制成1:10的樣(yang)品(pin)勻液。根(gen)據樣(yang)品(pin)汙(wu)染程(cheng)度(du)及(ji)檢(jian)驗需(xu)要(yao)，可(ke)進壹步制(zhi)成(cheng)10倍遞(di)增的樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)，選擇2～3 個(ge)適(shi)宜稀釋(shi)度(du)的樣品(pin)勻液（液(ye)體(ti)樣(yang)品(pin)可包括(kuo)原液(ye)）來(lai)進行接(jie)種。 
2.2 環境樣品(pin)檢測(ce)
2.2.1 環境樣品(pin)采(cai)集(ji)：用無(wu)菌(jun)的塗(tu)抹棒(bang)或其(qi)他采(cai)樣(yang)設備收集(ji)環境樣品(pin)。濕潤采(cai)樣(yang)設備液體(ti)體(ti)積(ji)≤10 mL。濕潤劑可(ke)以為(wei)無(wu)菌(jun)水(shui)，滅(mie)菌生(sheng)理鹽水(shui)（磷(lin)酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)）或者(zhe)緩(huan)沖(chong)蛋(dan)白(bai)腖水。
2.2.2 環境樣品(pin)處理：在收集(ji)的環境樣品(pin)中添加10 mL 滅菌生(sheng)理鹽水(shui)（或磷(lin)酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)），充(chong)分(fen)混(hun)勻。根(gen)據樣(yang)品(pin)汙(wu)染程(cheng)度(du)及(ji)檢(jian)驗需(xu)要(yao)，可(ke)進壹步制(zhi)成(cheng)10倍遞(di)增的樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)，選擇2～3 個(ge)適(shi)宜稀釋(shi)度(du)的樣品(pin)勻液（液(ye)體(ti)樣(yang)品(pin)可包括(kuo)原液(ye)）來(lai)進行接(jie)種。 
2.3 接(jie)種：將李斯(si)特(te)菌(jun)檢測(ce)板(ban)上(shang)層膜(mo)不幹膠標(biao)簽部分(fen)揭(jie)開(kai)，用無(wu)菌(jun)吸管(guan)吸取1mL樣品(pin)勻液均(jun)勻滴加(jia)到(dao)紙片(pian)上(shang)，迅速(su)貼(tie)好上(shang)層膜(mo)並水(shui)平(ping)晃動(dong)檢(jian)測(ce)板(ban)，靜(jing)置(zhi)10 s左右，待(dai)樣(yang)品(pin)勻液被(bei)吸(xi)附在濾紙上(shang)。每個(ge)稀釋(shi)度(du)接(jie)種兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)作為(wei)重復。
2.4 培(pei)養：將檢測(ce)板(ban)疊(die)在(zai)壹起，倒(dao)置(zhi)於(yu)36℃±1℃恒(heng)溫(wen)培(pei)養箱內，培(pei)養18～24h。
3、結(jie)果判讀
在檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)生(sheng)長(chang)的藍(lan)綠色點(dian)即為(wei)李斯(si)特(te)菌(jun)陽(yang)性點(dian)，若檢測(ce)板(ban)上(shang)無菌(jun)生(sheng)長(chang)或者(zhe)長(chang)出點(dian)為(wei)其(qi)他顏(yan)色(se)點(dian)即為(wei)李斯(si)特(te)菌(jun)陰性。

4、計(ji)數原則(ze)及(ji)報(bao)告(gao)方式
4.1 樣(yang)品(pin)計數(shu)
4.1.1 以生(sheng)長(chang)有(you)30～300CFU的檢(jian)測(ce)板(ban)為(wei)計(ji)數(shu)適(shi)宜範(fan)圍。
4.1.2 若只有(you)壹個(ge)稀釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)上(shang)的菌(jun)落數(shu)在計數(shu)合(he)適(shi)範(fan)圍30～300CFU之間(jian)，則計(ji)算兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)菌(jun)落(luo)數的平(ping)均值(zhi)，再(zai)除(chu)以相(xiang)應(ying)的稀釋(shi)倍數(shu)，作為(wei)每克(ke)（毫升(sheng)）中菌(jun)落(luo)總(zong)數結(jie)果。
4.1.3 若有(you)兩(liang)個(ge)連(lian)續(xu)稀釋(shi)度(du)在適(shi)宜計數(shu)範(fan)圍內時(shi)，按(an)式（1）計(ji)算：
                       ∑C
               N= ————————       •••••••••••••••••••（1） 
                   （n1+0.1n2）d
式中：
N——樣(yang)品(pin)中李斯(si)特(te)菌(jun)菌落數；
∑C——兩(liang)個(ge)連(lian)續(xu)稀釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)（含(han)適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的檢測(ce)板(ban)）李斯(si)特(te)菌(jun)落數之和(he)；
n1——適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的*個(ge)稀釋(shi)度(du)（低(di)）檢測(ce)板(ban)個(ge)數(shu)；
n2——適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的第二(er)個(ge)稀釋(shi)度(du)（高）檢(jian)測(ce)板(ban)個(ge)數(shu)；
d——*稀釋(shi)度(du)的稀釋(shi)倍數(shu)
 示例：

               （245+247+31+30）
               N= ————————  =2514
                  （2+0.1×2）×10-1
結(jie)果表述為(wei)2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若所有(you)稀釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)上(shang)均無(wu)菌落(luo)生(sheng)長(chang)，則以小於(yu)1/d（d—*低(di)稀釋(shi)倍數(shu)）計(ji)算。
4.1.5 低(di)數值(zhi)的估算：如果實驗樣品(pin)原液(ye)（水(shui)及(ji)液(ye)體(ti)飲(yin)料(liao)）或初始稀釋(shi)懸(xuan)液（其(qi)他樣品(pin)）的兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)的菌(jun)落數(shu)均小於(yu)30CFU，計(ji)算兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)的菌(jun)落數(shu)的平(ping)均數(shu)。計(ji)算式（2）：
                            ∑C
                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）
                            nd
式中：
NE——每毫升(sheng)或每克(ke)樣品(pin)中菌(jun)數(shu)的(de)估算值；
∑C——兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)菌落(luo)數的(de)和(he)；
n——檢(jian)測(ce)板(ban)的(de)數(shu)量(liang)；
d——樣(yang)品(pin)初始懸(xuan)液或實(shi)際(ji)接(jie)種懸(xuan)液的(de)稀釋(shi)倍數(shu)。
4.1.6 大(da)數值的(de)估算：若所有(you)稀釋(shi)度(du)的檢測(ce)板(ban)上(shang)菌落(luo)數均(jun)大於(yu)300CFU，計(ji)數(shu)接(jie)近300CFU的(de)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)的菌(jun)落並(bing)計算出平(ping)均數(shu)，其(qi)他檢測(ce)板(ban)可(ke)記(ji)錄為(wei)多不可計。結(jie)果計算式（3）：
                           ∑C
                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）
                           nd
式中：
NE——每毫升(sheng)或每克(ke)樣品(pin)中菌(jun)數(shu)的(de)估算值；
∑C——兩(liang)個(ge)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)菌落(luo)數之和(he)；
n——檢(jian)測(ce)板(ban)的(de)數(shu)量(liang)；
d——與樣品(pin)懸(xuan)液相(xiang)*的稀釋(shi)倍數(shu)。
5、結(jie)果報告(gao)
固(gu)體(ti)樣(yang)品(pin)以CFU/g為(wei)單(dan)位(wei)報告(gao)，液體(ti)樣(yang)品(pin)以CFU/mL為(wei)單(dan)位(wei)報告(gao)。
6、附加說(shuo)明(ming)
註(zhu)意使(shi)用過(guo)的(de)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)帶有(you)活(huo)菌，需(xu)及(ji)時(shi)按(an)照(zhao)生(sheng)物(wu)安全廢棄(qi)物(wu)處理原則進行處理。