壹、產品介(jie)紹(shao)
1、原理及(ji)適(shi)用(yong)範(fan)圍
糞鏈(lian)球菌(jun)普(pu)遍存在(zai)於(yu)水環境(jing)中(zhong)，為條(tiao)件(jian)致(zhi)病(bing)菌，它(ta)來源(yuan)於人和溫(wen)血動(dong)物(wu)的(de)糞便(bian)，可(ke)以(yi)在(zai)水中(zhong)存(cun)活(huo)很(hen)長(chang)時(shi)間(jian)，引起(qi)人類疾病(bing)。是(shi)水體受(shou)到糞(fen)便(bian)汙染的(de)重(zhong)要(yao)指(zhi)標(biao)菌，更能(neng)客(ke)觀的(de)反(fan)映(ying)水質衛(wei)生狀(zhuang)況(kuang)。中(zhong)華(hua)人民(min)共(gong)和國(guo)城鎮建(jian)設(she)標(biao)準在(zai)對(dui)城市(shi)供(gong)水、飲(yin)用(yong)水水質監(jian)測中(zhong)增(zeng)加(jia)了(le)水中(zhong)糞(fen)鏈球菌的(de)檢(jian)測指(zhi)標(biao)。糞鏈(lian)球菌(jun)檢(jian)測板是(shi)壹種(zhong)預(yu)先(xian)制備好的(de)壹次性(xing)培養基產品，含(han)有標(biao)準的(de)營(ying)養(yang)培養基，冷水可(ke)溶性(xing)的(de)吸水凝膠和脫(tuo)氫(qing)酶指(zhi)示劑氯化(hua)三苯基四氮(dan)唑（TTC），菌落在(zai)檢(jian)測板上呈(cheng)紅色(se)帶(dai)黃(huang)暈斑點。本產品適(shi)合於(yu)生(sheng)活(huo)飲(yin)用(yong)水、生產(chan)加(jia)工(gong)用(yong)水及食品中(zhong)糞(fen)鏈球菌的(de)測定。                 
執(zhi)行(xing)標(biao)準：中(zhong)華(hua)人民(min)共(gong)和國(guo)國(guo)家(jia)標(biao)準《飲(yin)用(yong)天然礦(kuang)泉水檢(jian)驗(yan)方法》（GB/T 8538）；中(zhong)華(hua)人民(min)共(gong)和國(guo)進出口(kou)商(shang)品檢(jian)驗(yan)行(xing)業標(biao)準《出(chu)口商(shang)品中(zhong)糞(fen)鏈球菌群(qun)檢(jian)驗(yan)》（SN/T 0475）。 
2、操(cao)作方法
2.1水樣品檢(jian)測
2.1.1 水樣過濾(lv)：將(jiang)滅(mie)菌的(de)過濾(lv)裝置(zhi)連(lian)接(jie)到(dao)抽濾(lv)瓶上，用(yong)滅(mie)菌鑷(nie)子夾(jia)取(qu)直徑47 mm～50 mm，孔(kong)徑為0.45μm的滅(mie)菌濾(lv)膜(mo)，放在(zai)濾(lv)器(qi)底(di)部(bu)，旋緊蓋(gai)子(zi)，將(jiang)250 mL水樣註入濾(lv)器(qi)中(zhong)抽(chou)濾(lv)。
2.1.2  揭(jie)開(kai)檢(jian)測板上層(ceng)膜，在(zai)檢(jian)測板紙(zhi)片上加(jia)1 mL無(wu)菌水濕(shi)潤(run)後(hou)，迅(xun)速用(yong)無菌鑷(nie)子將(jiang)過濾(lv)水樣的濾(lv)膜(mo)移(yi)放在(zai)檢(jian)測板紙(zhi)片上（濾(lv)膜(mo)截留(liu)細菌(jun)面向上），濾(lv)膜(mo)與紙(zhi)片之(zhi)間(jian)不(bu)要夾(jia)留(liu)著氣(qi)泡(pao)，貼(tie)好上層(ceng)膜。
2.2食品樣品檢(jian)測
2.2.1  取25 g（或(huo)25 mL）樣品放入裝有225 mL生(sheng)理(li)鹽水的均質(zhi)袋(dai)中(zhong)，以(yi)8000 r/min均質(zhi)1～2 min，制(zhi)成(cheng)1:10樣品均液，根(gen)據樣品汙(wu)染程(cheng)度(du)及(ji)檢(jian)驗(yan)需(xu)要(yao)，可(ke)進壹步(bu)制成(cheng)10倍遞增(zeng)的(de)樣品稀釋(shi)液。
2.2.2 將(jiang)糞鏈球菌(jun)檢(jian)測板上層(ceng)膜不(bu)幹(gan)膠標(biao)簽(qian)部(bu)分揭(jie)開(kai)，用(yong)無菌吸管(guan)吸取(qu)1 mL樣品稀釋(shi)液均勻(yun)滴加(jia)到(dao)紙(zhi)片上，迅(xun)速貼(tie)好上層(ceng)膜並(bing)水平晃動(dong)檢(jian)測板，靜置(zhi)10 s左(zuo)右(you)，待(dai)樣品稀釋(shi)液被(bei)吸附在(zai)濾(lv)紙(zhi)上。每(mei)個稀釋(shi)度接(jie)種(zhong)兩個檢(jian)測板作為重復(fu)。
2.3 培養：將(jiang)檢(jian)測板疊在(zai)壹起(qi)，倒置於(yu)恒溫培養箱(xiang)內(nei)，36℃±1℃，培養15～24 h。
3、結果(guo)判(pan)讀(du)
在(zai)檢(jian)測板（濾(lv)膜(mo)）上生(sheng)長(chang)的(de)紅(hong)色(se)帶(dai)黃(huang)暈的斑(ban)點即(ji)為糞鏈(lian)球(qiu)菌陽(yang)性(xing)，若(ruo)紙(zhi)片上的(de)紅色(se)斑(ban)點無(wu)黃(huang)暈則為糞鏈(lian)球(qiu)菌陰(yin)性(xing)。

4、計(ji)數(shu)原(yuan)則及報告方式
4.1  濾(lv)膜(mo)過濾(lv)水樣：以(yi)濾(lv)過(guo)壹張無(wu)菌濾(lv)膜(mo)後(hou)產生(sheng)的(de)菌(jun)落(luo)數(shu)計(ji)算，選擇菌(jun)落數(shu)在(zai)20～100CFU的(de)檢(jian)測板進行(xing)計數(shu)後(hou)即(ji)為250 mL水樣品中(zhong)所含(han)的菌(jun)落總數(shu)。結果(guo)以(yi)CFU/250 mL為單位(wei)報告。
4.2 食品樣品計(ji)數(shu)
4.2.1 以(yi)生(sheng)長(chang)有30～300CFU的(de)檢(jian)測板為計數(shu)適(shi)宜範(fan)圍。
4.2.2 若只有壹個稀釋(shi)度檢(jian)測板上的(de)菌落(luo)數(shu)在(zai)計(ji)數(shu)合適(shi)範(fan)圍30～300CFU之間(jian)，則(ze)計算兩個檢(jian)測板菌落(luo)數(shu)的(de)平均值(zhi)，再除(chu)以(yi)相應(ying)的稀釋(shi)倍數(shu)，作(zuo)為每(mei)克(ke)（毫(hao)升(sheng)）中(zhong)菌(jun)落總數(shu)結果(guo)。
4.2.3 若有兩個連(lian)續稀釋(shi)度在(zai)適(shi)宜計數(shu)範(fan)圍內時(shi)，按式（1）計算：
                        ∑C
               N= ————————     •••••••••••••••••••（1）
                   （n1+0.1n2）d
   式中(zhong)：
   N——樣品中(zhong)糞(fen)鏈球菌菌(jun)落(luo)數(shu)；
   ∑C——兩個連(lian)續稀釋(shi)度檢(jian)測板（含(han)適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的(de)檢(jian)測板）糞鏈(lian)球(qiu)菌(jun)菌(jun)落之和；
   n1——適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的(de)*個稀釋(shi)度（低(di)）檢(jian)測板個數(shu)
   n2——適(shi)宜範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的(de)第(di)二(er)個稀釋(shi)度（高(gao)）檢(jian)測板個數(shu)
   d——*稀釋(shi)度的(de)稀釋(shi)倍數(shu)
 示(shi)例(li)：

 
                   （245+247+31+30）
               N= —————————— =2514
                  （2+0.1×2）×10-1
結果(guo)表(biao)述(shu)為2.5×103CFU/g(ml)。
4.2.4 若所有稀釋(shi)度檢(jian)測板上均無(wu)菌(jun)落生長(chang)，則(ze)以(yi)小(xiao)於(yu)1/d（d—*低(di)稀釋(shi)倍數(shu)）計(ji)算。
4.2.5低(di)數(shu)值(zhi)的估(gu)算(suan)：如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)樣品原(yuan)液（水及液體飲(yin)料）或(huo)初(chu)始(shi)稀釋(shi)懸液（其(qi)他(ta)樣品）的(de)兩個檢(jian)測板上的(de)菌落(luo)數(shu)均小(xiao)於(yu)30CFU，計算兩個檢(jian)測板上的(de)菌落(luo)數(shu)的(de)平均數(shu)。計(ji)算式（2）：
                    ∑C
                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）
                        nd
式中(zhong)：
NE——每(mei)毫(hao)升(sheng)或(huo)每(mei)克(ke)樣品中(zhong)菌(jun)數(shu)的(de)估(gu)算(suan)值(zhi)；
∑C——兩個檢(jian)測板上菌(jun)落數(shu)的(de)和；
n——檢(jian)測板的數(shu)量(liang)；
d——樣品初(chu)始(shi)懸液或(huo)實(shi)際接(jie)種(zhong)懸(xuan)液的(de)稀釋(shi)倍數(shu)。
4.2.6大(da)數(shu)值(zhi)的估(gu)算(suan)：若(ruo)所有稀釋(shi)度的(de)檢(jian)測板上菌(jun)落數(shu)均大(da)於300CFU，計(ji)數(shu)*接(jie)近(jin)300CFU的檢(jian)測板上的(de)菌落(luo)並(bing)計算出平均數(shu)，其(qi)他(ta)檢(jian)測板可(ke)記錄為多不(bu)可(ke)計。結果(guo)計算(suan)式(shi)（3）：
                        ∑C
                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）
                        nd
式中(zhong)：
NE——每(mei)毫(hao)升(sheng)或(huo)每(mei)克(ke)樣品中(zhong)菌(jun)數(shu)的(de)估(gu)算(suan)值(zhi)；
∑C——兩個檢(jian)測板上菌(jun)落數(shu)之(zhi)和；
n——檢(jian)測板的數(shu)量(liang)；
d——與樣品懸(xuan)液相*的稀釋(shi)倍數(shu)。
5、結果(guo)報告
固體樣品以(yi)CFU/g為單位(wei)報告，液體樣品以(yi)CFU/mL為單位(wei)報告。
6、附加(jia)說(shuo)明(ming)
註意(yi)使(shi)用(yong)過的檢(jian)測板上帶(dai)有活(huo)菌，需(xu)及(ji)時(shi)按照生物(wu)安全廢棄(qi)物(wu)處(chu)理原則進行(xing)處理(li)。