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產(chan)品展(zhan)示(shi)PRODUCTS
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壹(yi)、李斯特菌微(wei)生物(wu)檢測(ce)板(ban)產(chan)品介紹
1、原理及適(shi)用(yong)範圍(wei)
李(li)斯特菌檢(jian)測(ce)板(ban)是(shi)壹(yi)種(zhong)預(yu)先(xian)制(zhi)備(bei)好的(de)壹(yi)次(ci)性(xing)培養(yang)基(ji)產(chan)品,含有(you)標準(zhun)的營養(yang)培養(yang)基(ji),選擇(ze)性(xing)試劑,冷水(shui)可溶性(xing)吸水(shui)凝膠(jiao)和β-D-葡萄(tao)糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯(xian)色底物( X-GLU ),李斯特菌檢(jian)測(ce)板(ban)適(shi)用(yong)於檢測(ce)或(huo)者(zhe)計數(shu)食品及環(huan)境(jing)樣品中的(de)李(li)斯特菌菌數(shu)。李斯特菌檢(jian)測(ce)板(ban)檢(jian)測的李斯特菌包(bao)括(kuo)單核細胞增(zeng)生李(li)斯特菌(Listeria.monocytogenes ),英(ying)諾克(ke)李斯特菌(Listeria.innocua),威(wei)氏(shi)李(li)斯特菌(Listeria.welshi),但(dan)不(bu)能區(qu)分(fen)各種(zhong)菌。
2、李(li)斯特菌微(wei)生物(wu)檢測(ce)板(ban)操作(zuo)方(fang)法(fa)
2.1 食品樣(yang)品(pin)檢測
2.1.1 食品樣(yang)品(pin)處(chu)理:取樣品(pin)25 g(mL)放入(ru)裝(zhuang)有(you)225 mL滅菌磷(lin)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)(或(huo)生理鹽水(shui))的(de)取樣罐(guan)或(huo)均質袋(dai)內,制(zhi)成1:10的(de)樣品勻(yun)液(ye)。根(gen)據樣(yang)品汙(wu)染程(cheng)度(du)及檢驗需要(yao),可進壹(yi)步制(zhi)成10倍(bei)遞增的(de)樣品(pin)稀釋液(ye),選擇(ze)2~3 個(ge)適(shi)宜(yi)稀(xi)釋度(du)的樣(yang)品勻(yun)液(ye)(液(ye)體樣(yang)品(pin)可包(bao)括(kuo)原液(ye))來(lai)進(jin)行接種(zhong)。
2.2 環(huan)境(jing)樣品檢測(ce)
2.2.1 環(huan)境(jing)樣品采(cai)集:用(yong)無(wu)菌的(de)塗(tu)抹棒(bang)或(huo)其他采(cai)樣設(she)備收集環(huan)境(jing)樣品。濕(shi)潤(run)采(cai)樣設(she)備液(ye)體體(ti)積(ji)≤10 mL。濕(shi)潤(run)劑可以為(wei)無(wu)菌水(shui),滅菌生理鹽水(shui)(磷(lin)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye))或(huo)者(zhe)緩沖(chong)蛋(dan)白腖水(shui)。
2.2.2 環(huan)境(jing)樣品處(chu)理:在(zai)收集的環(huan)境(jing)樣品中添(tian)加(jia)10 mL 滅菌生理鹽水(shui)(或(huo)磷(lin)酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)),充分混勻(yun)。根(gen)據樣(yang)品汙(wu)染程(cheng)度(du)及檢驗需要(yao),可進壹(yi)步制(zhi)成10倍(bei)遞增的(de)樣品(pin)稀釋液(ye),選擇(ze)2~3 個(ge)適(shi)宜(yi)稀(xi)釋度(du)的樣(yang)品勻(yun)液(ye)(液(ye)體樣(yang)品(pin)可包(bao)括(kuo)原液(ye))來(lai)進(jin)行接種(zhong)。
2.3 接種(zhong):將(jiang)李斯特菌檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)層膜(mo)不(bu)幹(gan)膠(jiao)標簽(qian)部分(fen)揭開(kai),用(yong)無(wu)菌吸(xi)管(guan)吸取1mL樣品(pin)勻(yun)液(ye)均勻(yun)滴加(jia)到(dao)紙片上(shang),迅速(su)貼(tie)好上(shang)層膜(mo)並水(shui)平(ping)晃動檢(jian)測(ce)板(ban),靜(jing)置(zhi)10 s左(zuo)右(you),待(dai)樣品勻(yun)液(ye)被吸(xi)附(fu)在(zai)濾紙上(shang)。每個(ge)稀釋(shi)度(du)接種(zhong)兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)作(zuo)為(wei)重(zhong)復。
2.4 培養(yang):將(jiang)檢測(ce)板(ban)疊(die)在(zai)壹(yi)起,倒置(zhi)於36℃±1℃恒(heng)溫(wen)培養(yang)箱(xiang)內,培養(yang)18~24h。
3、結(jie)果(guo)判(pan)讀
在(zai)檢測板(ban)上(shang)生長(chang)的(de)藍綠色點即為李(li)斯特菌陽(yang)性(xing)點,若(ruo)檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)無(wu)菌生長(chang)或(huo)者(zhe)長(chang)出(chu)點為其他顏色點即為李(li)斯特菌陰性(xing)。

4、計數(shu)原則及報告(gao)方式(shi)
4.1 樣(yang)品計數(shu)
4.1.1 以生長(chang)有(you)30~300CFU的檢(jian)測板(ban)為(wei)計數(shu)適(shi)宜(yi)範圍(wei)。
4.1.2 若(ruo)只(zhi)有(you)壹(yi)個(ge)稀釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)上(shang)的菌落(luo)數(shu)在(zai)計數(shu)合適(shi)範圍(wei)30~300CFU之(zhi)間(jian),則計算兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)菌落(luo)數(shu)的平(ping)均值,再(zai)除(chu)以相(xiang)應(ying)的(de)稀釋倍數(shu),作(zuo)為(wei)每克(ke)(毫升(sheng))中(zhong)菌落(luo)總數(shu)結(jie)果(guo)。
4.1.3 若(ruo)有(you)兩(liang)個(ge)連續稀(xi)釋(shi)度(du)在(zai)適(shi)宜(yi)計數(shu)範圍(wei)內時,按式(shi)(1)計算:
∑C
N= ———————— •••••••••••••••••••(1)
(n1+0.1n2)d
式(shi)中:
N——樣(yang)品中李(li)斯特菌菌落(luo)數(shu);
∑C——兩(liang)個(ge)連續稀(xi)釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)(含(han)適(shi)宜(yi)範圍(wei)菌落(luo)數(shu)的檢測板(ban))李(li)斯特菌落(luo)數(shu)之(zhi)和;
n1——適(shi)宜(yi)範圍(wei)菌落(luo)數(shu)的*個(ge)稀釋(shi)度(du)(低)檢(jian)測板(ban)個(ge)數(shu);
n2——適(shi)宜(yi)範圍(wei)菌落(luo)數(shu)的第二個(ge)稀釋(shi)度(du)(高)檢(jian)測板(ban)個(ge)數(shu);
d——*稀(xi)釋度(du)的稀(xi)釋倍(bei)數(shu)
示(shi)例:
稀(xi)釋度(du) | 1:10(*個(ge)稀釋(shi)度(du)) | 1:100(第二個(ge)稀釋(shi)度(du)) |
菌落(luo)數(shu) | 245,247 | 31,30 |
(245+247+31+30)
N= ———————— =2514
(2+0.1×2)×10-1
結(jie)果(guo)表(biao)述(shu)為(wei)2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若(ruo)所有(you)稀釋(shi)度(du)檢測(ce)板(ban)上(shang)均無(wu)菌落(luo)生長(chang),則以小(xiao)於1/d(d—*低稀(xi)釋倍數(shu))計算。
4.1.5 低(di)數(shu)值的估(gu)算:如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)樣品原液(ye)(水(shui)及液(ye)體飲(yin)料(liao))或(huo)初(chu)始稀(xi)釋(shi)懸(xuan)液(ye)(其他樣(yang)品)的(de)兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)上(shang)的菌落(luo)數(shu)均小於30CFU,計算兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)上(shang)的菌落(luo)數(shu)的平(ping)均數(shu)。計算式(shi)(2):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(2)
nd
式(shi)中:
NE——每毫升(sheng)或(huo)每克(ke)樣品中(zhong)菌數(shu)的估(gu)算值(zhi);
∑C——兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)上(shang)菌落(luo)數(shu)的和;
n——檢(jian)測板(ban)的(de)數(shu)量(liang);
d——樣(yang)品初(chu)始懸(xuan)液(ye)或(huo)實(shi)際接種(zhong)懸(xuan)液(ye)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。
4.1.6 大(da)數(shu)值的估(gu)算:若(ruo)所有(you)稀釋(shi)度(du)的檢(jian)測板(ban)上(shang)菌落(luo)數(shu)均大於300CFU,計數(shu)接近300CFU的檢(jian)測(ce)板(ban)上(shang)的菌落(luo)並(bing)計算出(chu)平(ping)均數(shu),其他檢(jian)測板(ban)可記錄為(wei)多(duo)不(bu)可計。結(jie)果(guo)計算式(shi)(3):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(3)
nd
式(shi)中:
NE——每毫升(sheng)或(huo)每克(ke)樣品中(zhong)菌數(shu)的估(gu)算值(zhi);
∑C——兩(liang)個(ge)檢測(ce)板(ban)上(shang)菌落(luo)數(shu)之(zhi)和;
n——檢(jian)測板(ban)的(de)數(shu)量(liang);
d——與(yu)樣品懸(xuan)液(ye)相*的(de)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)。
5、結(jie)果(guo)報告(gao)
固體(ti)樣(yang)品以CFU/g為(wei)單(dan)位報告(gao),液(ye)體樣(yang)品(pin)以CFU/mL為(wei)單(dan)位報告(gao)。
6、附(fu)加(jia)說(shuo)明
註(zhu)意使(shi)用(yong)過的(de)檢測(ce)板(ban)上(shang)帶有(you)活(huo)菌,需(xu)及時按照生物(wu)安全廢(fei)棄物處(chu)理原則進行處(chu)理。