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壹、菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)微(wei)生物檢(jian)測板產(chan)品介紹(shao)
1、原理及適用範(fan)圍
菌落(luo)總(zong)數(shu)是(shi)指(zhi)樣(yang)品經過(guo)處(chu)理，在壹(yi)定條件(jian)下培(pei)養(yang)後(hou)所得(de)1 mL（g）檢(jian)樣(yang)或(huo)單(dan)位(wei)面(mian)積(ji)樣(yang)品中所含菌落的總(zong)數(shu)，是(shi)常(chang)用的微生物檢(jian)測項目。菌落(luo)總(zong)數(shu)檢(jian)測板是(shi)壹(yi)種預(yu)先(xian)制(zhi)備(bei)好的壹次(ci)性(xing)培(pei)養(yang)基(ji)產(chan)品，含有(you)標準的營養(yang)培(pei)養(yang)基(ji)，吸(xi)水凝(ning)膠和(he)脫(tuo)氫(qing)酶指(zhi)示(shi)劑氯化三(san)苯基(ji)四氮(dan)唑（TTC），菌落在檢(jian)測板上(shang)呈(cheng)紅色，這樣(yang)可(ke)縮短(duan)計(ji)數(shu)時(shi)間(jian)和(he)增強(qiang)計(ji)數(shu)效果(guo)。本(ben)產(chan)品適合(he)於(yu)各(ge)類(lei)食(shi)品及食(shi)品原料中菌落(luo)總(zong)數(shu)的測定。執行(xing)標準：《食(shi)品安(an)全國家(jia)標(biao)準 食(shi)品微生物學(xue)檢驗 菌落總(zong)數(shu)測定》（GB 4789.2）。
2、菌落(luo)總(zong)數(shu)微(wei)生物檢(jian)測板操(cao)作(zuo)方法
2.1 樣(yang)品處(chu)理：取樣(yang)品 25 mL（g）放(fang)入(ru)含有(you)225 mL滅菌(jun)磷(lin)酸(suan)緩(huan)沖稀(xi)釋(shi)液（或生理鹽水）的取樣(yang)罐(guan)或均(jun)質袋(dai)內，制成(cheng)1:10的樣(yang)品勻(yun)液，需要(yao)時用(yong)1 mol/LNaOH或(huo)1mol/L HCl溶液調節樣(yang)品勻(yun)液pH至(zhi)6.6～7.2。用1mL滅菌(jun)吸(xi)管(guan)吸(xi)取(qu)1:10稀(xi)釋(shi)液1 mL，註入(ru)含有(you)9 mL稀(xi)釋(shi)液的試(shi)管(guan)內，振(zhen)搖後(hou)成(cheng)為(wei)1:100的樣(yang)品勻(yun)液，以此(ci)類(lei)推，做出(chu)1:1000等(deng)稀(xi)釋(shi)度(du)的樣(yang)品勻(yun)液，每(mei)次(ci)換(huan)壹(yi)支(zhi)吸(xi)管(guan)。
2.2 接種(zhong)：壹(yi)般食(shi)品選2～3個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)進(jin)行(xing)檢測，含菌(jun)量少的液體樣(yang)品（如飲(yin)用純(chun)水和(he)礦泉(quan)水等(deng)）可(ke)直(zhi)接吸(xi)取(qu)原液進行(xing)檢(jian)測。將(jiang)菌落總(zong)數(shu)檢(jian)測板置於(yu)平(ping)坦實驗臺(tai)面，揭開上(shang)層(ceng)膜(mo)，用無菌吸(xi)管(guan)吸(xi)取(qu)1 mL樣(yang)品勻(yun)液滴加到檢測板內，迅速貼(tie)好上(shang)層(ceng)膜(mo)並水平(ping)晃動(dong)檢(jian)測板，讓(rang)樣(yang)品勻(yun)液均(jun)勻(yun)吸(xi)附在濾(lv)紙上(shang)，靜(jing)置10s左右(you)，待樣(yang)品勻(yun)液被吸(xi)附在濾(lv)紙上(shang)。每(mei)個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)接種(zhong)兩(liang)片(pian)。同時(shi)做壹(yi)片(pian)空白(bai)陰(yin)性(xing)對照(zhao)。
2.3 培(pei)養(yang)：將(jiang)檢測板疊在壹(yi)起(qi)，倒(dao)置於(yu)恒(heng)溫(wen)培(pei)養(yang)箱內。壹般食(shi)品培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)為(wei)36℃±1℃，培(pei)養(yang)15～24 h；水產(chan)品培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)為(wei)30℃±1℃，培(pei)養(yang)48h。
3、結(jie)果(guo)判讀
細菌(jun)在檢(jian)測板上(shang)生長後(hou)會顯示(shi)紅色斑點(dian)，選擇(ze)菌落數(shu)適中（30～300 CFU）的檢測板進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)，乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)後(hou)即(ji)為(wei)每(mei)毫(hao)升(sheng)（或每(mei)克）樣(yang)品中所含的細菌(jun)菌(jun)落總(zong)數(shu)。

4、計(ji)數(shu)原則及報告(gao)方式(shi)
4.1 若只(zhi)有(you)壹個(ge)稀(xi)釋(shi)度(du)檢(jian)測板上(shang)的菌落(luo)數(shu)在適宜(yi)計(ji)數(shu)範(fan)圍內，計(ji)算(suan)兩(liang)個(ge)檢(jian)測板菌(jun)落(luo)數(shu)的平(ping)均(jun)值(zhi)，再將(jiang)平(ping)均(jun)值(zhi)乘(cheng)以相應(ying)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)，作(zuo)為(wei)每(mei)克（或毫(hao)升(sheng)）樣(yang)品中菌落總(zong)數(shu)結(jie)果(guo)。
4.2 若有(you)兩(liang)個(ge)連(lian)續(xu)稀(xi)釋(shi)度(du)的檢測板菌(jun)落(luo)數(shu)在適宜(yi)計(ji)數(shu)範(fan)圍內時，按(an)式(shi)(1)計(ji)算(suan): 

式(shi)中：
N——樣(yang)品中菌落數(shu)；
∑C——檢(jian)測板上(shang)(含(han)適宜(yi)範(fan)圍菌落(luo)數(shu)的測試(shi)片(pian))菌落(luo)數(shu)之(zhi)和(he)；
n1——*稀(xi)釋(shi)度(du)（低稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)）檢(jian)測板數(shu)；
n2——第(di)二(er)稀(xi)釋(shi)度(du)（高(gao)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)）檢(jian)測板數(shu)；
d——稀(xi)釋(shi)因(yin)子(zi)(*稀(xi)釋(shi)度(du))。
示(shi)例(li)：

上(shang)述(shu)數(shu)據經“四舍(she)五入(ru)”後(hou)，表示25000或(huo)2.5×104。
4.3 若所有(you)的稀(xi)釋(shi)度(du)菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)均(jun)大於(yu)300 CFU，則對稀(xi)釋(shi)度(du)較高(gao)的檢測板進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)，其他檢(jian)測板可(ke)記(ji)錄為(wei)多不(bu)可(ke)計(ji)，結(jie)果(guo)按(an)平(ping)均(jun)菌落(luo)數(shu)乘(cheng)以較高(gao)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)計(ji)算(suan)。
4.4 若所有(you)的稀(xi)釋(shi)度(du)菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)30 CFU，則應(ying)按(an)稀(xi)釋(shi)度(du)*低的平(ping)均(jun)菌落(luo)數(shu)乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)計(ji)算(suan)。
4.5 若所有(you)的稀(xi)釋(shi)度(du)（包括(kuo)液體樣(yang)品原液）均(jun)無菌落(luo)生長，則以小(xiao)於(yu)1乘(cheng)以*低稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)計(ji)算(suan)。
4.6 若所有(you)稀(xi)釋(shi)度(du)的平(ping)均(jun)菌落(luo)數(shu)均(jun)不在30 CFU～300 CFU之(zhi)間，其中(zhong)壹部分(fen)小(xiao)於(yu)30 CFU或(huo)大於300CFU，則以接近(jin)30 CFU或(huo)300 CFU的平(ping)均(jun)菌落(luo)數(shu)乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)計(ji)算(suan)。
4.7 菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)的報告(gao)
4.7.1 菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)在100 CFU以內時，按(an)“四舍(she)五入(ru)”原則修約，采(cai)用(yong)兩(liang)位(wei)有(you)效數(shu)字(zi)報告(gao)。
4.7.2 大(da)於(yu)或等於(yu)100 CFU時(shi)，第三(san)位(wei)數(shu)字(zi)采(cai)用(yong)“四舍(she)五入(ru)”原則修約後(hou)，取前兩(liang)位(wei)數(shu)字(zi)，後(hou)面的0代替(ti)位(wei)數(shu)，也(ye)可(ke)用(yong)指(zhi)數(shu)形(xing)式(shi)來(lai)表示，按(an)“四舍(she)五入(ru)”原則修約後(hou)，采(cai)用(yong)兩(liang)位(wei)有(you)效數(shu)字(zi)。
4.7.3 若測試(shi)片(pian)上(shang)壹(yi)片(pian)紅色無法計(ji)數(shu)時(shi)，則報告(gao)多不(bu)可(ke)計(ji)。
4.7.4 若空白對照(zhao)上(shang)有(you)菌落(luo)生長，則此(ci)次(ci)檢(jian)測結果(guo)無效。
4.7.5 固(gu)體樣(yang)品以CFU/g為(wei)單(dan)位(wei)報告(gao)，液體樣(yang)品以CFU/mL為(wei)單(dan)位(wei)報告(gao)。
5、附加(jia)說明(ming)
5.1 菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)檢(jian)測板檢(jian)測結果(guo)與(yu)傳統平(ping)板計(ji)數(shu)瓊(qiong)脂平(ping)板法符(fu)合(he)率(lv)可(ke)達(da)90％以上(shang)。
5.2 磷(lin)酸(suan)緩(huan)沖液稀(xi)釋(shi)液的配制(zhi)與(yu)滅(mie)菌：貯(zhu)存液：稱取(qu)34.0 g分(fen)析純(chun)磷(lin)酸(suan)二(er)氫(qing)鉀（KH2PO4）溶(rong)於(yu)500 mL蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)純(chun)凈水中(zhong)，用(yong)大約(yue)175 mL的1 mol/L氫(qing)氧化(hua)鈉(na)（NaOH）溶(rong)液調節PH至(zhi)7.2，用蒸餾(liu)水稀(xi)釋(shi)至(zhi)1000 mL後(hou)貯存於(yu)冰(bing)箱。稀(xi)釋(shi)液：取貯(zhu)存(cun)液1.25 mL，用蒸(zheng)餾(liu)水稀(xi)釋(shi)至(zhi)1000 mL，分(fen)裝(zhuang)於(yu)適宜(yi)容(rong)器(qi)中(zhong)，121℃高壓(ya)滅菌(jun)15 min，或(huo)放(fang)入(ru)消毒(du)碗(wan)櫃(gui)中(zhong)消(xiao)毒(du)。
5.3 生理鹽水的配制(zhi)與(yu)滅(mie)菌：取(qu)8.5 g分(fen)析純(chun)氯化鈉（NaCl）溶解(jie)到1000 mL蒸餾(liu)水或(huo)純(chun)凈水中(zhong)，分(fen)裝(zhuang)於(yu)適宜(yi)容(rong)器(qi)中(zhong)，121℃高壓(ya)滅菌(jun)15 min，或(huo)放(fang)入(ru)消毒(du)碗(wan)櫃(gui)中(zhong)消(xiao)毒(du)。
5.4 註意使(shi)用(yong)過的檢測板上(shang)帶有(you)活菌(jun)，需及時按(an)照(zhao)生物安(an)全廢棄(qi)物處(chu)理原則進(jin)行(xing)處(chu)理。